Bst 4.0 SYBR Green Bead試劑該制品為全體系凍干微球制品，內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用

的反應(yīng)緩沖液、SYBR Green 熒光染料、Mg

2+、dNTP、

Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時(shí)只需要加入引物、

模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶

具有依賴(lài)于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依

賴(lài)于 DNA 的聚合酶活性，因此無(wú)論 DNA 或 RNA 樣本均

可使用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增。該制品是進(jìn)行 LAMP 及

RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。

SYBR Green 系列產(chǎn)品為實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)的專(zhuān)用試劑，

可直接在恒溫?zé)晒鈨x或定量 PCR 以上進(jìn)行 LAMP 反應(yīng)擴(kuò)

增。

貨 號(hào) 名 稱(chēng) 規(guī)格

A3828-03 Bst 4.0 SG Bead 100 個(gè)

儲(chǔ)存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個(gè)月。

使用凍干微球進(jìn)行全擴(kuò)增體系用品的制備方法：將優(yōu)化的

擴(kuò)增引物分裝于 0.2 ml EP 管底部，于 70-80℃條件烘干

1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已經(jīng)含有干燥的擴(kuò)增引物，

再加入一粒凍干微球即可制備成全擴(kuò)增體系干燥品，該干

燥品無(wú)需冷鏈運(yùn)輸，可長(zhǎng)期保存。

反應(yīng)體系說(shuō)明：每一個(gè)凍干微球?yàn)榘凑?25 μl 反應(yīng)體系建

立，在使用時(shí)只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可進(jìn)

行反應(yīng)。

使用實(shí)例，進(jìn)行 LAMP 熒光擴(kuò)增

1. 配制熒光 LAMP 反應(yīng)體系

在 0.2 ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑

Bst 4.0 SG Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到液體總量 25 μl

10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4-8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。

2. 反應(yīng)體系配好后，置于熒光定量 PCR 儀中于 65°C

進(jìn)行反應(yīng) 15~30min。1min 收集一次熒光信號(hào)。讀取擴(kuò)增

曲線進(jìn)行陰性和陽(yáng)性判讀。

3. 根據(jù)熒光擴(kuò)增曲線判讀陽(yáng)性和陰性。

注意事項(xiàng)：

（1）關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，

可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，可以有效的減少氣

溶膠的污染。實(shí)驗(yàn)證明礦物油并不影響機(jī)器的熒光數(shù)值讀

取。

（2）關(guān)于擴(kuò)增曲線的異常：由于 LAMP 擴(kuò)增速度較快，

熒光信號(hào)讀取可能存在矯正計(jì)算問(wèn)題，這與熒光設(shè)備的軟

件算法有管。在有些熒光 PCR 儀上，在相對(duì)熒光模式下，

表現(xiàn)出曲線飛峰、終點(diǎn)曲線下降的問(wèn)題。此時(shí)調(diào)整到原始

熒光值模式下觀察結(jié)果，或致電相應(yīng)設(shè)備供應(yīng)商進(jìn)行咨

詢(xún)。

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